Наборы для ускоренной биохимической идентификации культур

Biochemical Identification Test Kits

KBM 003 HiMotility™ Biochemical Kit for Listeria Species
Набор HiMotility™ для биохимической идентификации листерий

Введение:

Листерии широко распространены в природе и часто обнаруживаются в разнообразных пищевых продуктах. Листериоз человека встречается в виде спорадических заболеваний или вспышек и имеет уровень летальности от 20 до 30%. Lysteria monocytogenes является возбудителем первичного менингита, энцефалита, септицемии, а у беременных - причиной абортов, преждевременных или поздних родов. КВМ003 можно использовать для скрининга проб пищевых продуктов и соответствующего клинического материала, а также контроля лабораторных штаммов.

Принцип:

Каждый набор КВМ003 является стандартизованной колориметрической тест-системой для идентификации листерий по подвижности,ферментации углеводов и другим признакам . Результаты тестов учитываютпосле инкубирования засеянной тест-системы по сдвигу рН и утилизации субстрата, что проявляется видимым изменением цвета среды непосредственно, или после добавления соответствующих реактивов.

Состав набора:

Условия и срок хранения:

Хранить при 2..8 °С. Срок годности- 12 месяцев.

Инструкции по применению:

Приготовление инокулюма:

• Набор КВМ003 нельзя использовать для прямого посева исследуемого материала (клинических проб или суспензий пищевых продуктов), его применяют для тестирования только чистых культур бактерий. Снимите изолированную колонию с агара ПАЛКАМ (М1064) или триптозного агара (М538) с добавлением крови или без нее и засейте бактерии в 5мл бульона с сердечно-мозговым настоем (М210). Инкубируйте посев при 37°С в течение 6-8 ч или до появления необходимой мутности (не менее 10 ед. при длине волны 620 нм).
ВНИМАНИЕ: При использовании менее мутного бульона может быть получен ложно-отрицательный результат.

Методика посева:

• Асептически вскрыть набор. Удалить защитную фольгу с лунок.
• Взяв полную петлю инокулюма, засейте уколом 1-ю лунку. НЕ ЗАСЕВАЙТЕ ВТОРУЮ ЛУНКУ!
• Таким же количеством инокулюма засейте каждую оставшуюся лунку стрипа (кроме 2-й), прокалывая среду до дна.

Инкубирование:

24-48 ч. при 20-26°С.

• Результаты интерпретирую т в соответствии с данными таблицы. Реактивы в 3-ю, 4-ю, 5-ю и 6-ю лунки вносят после окончания периода инкубирования (24-48 ч).

• Подвижность наблюдается в виде распространения роста из 1-й лунки во вторую, что сопровождается почернением среды.
• Гидролиз зекулина проявляется почернением среды в 1-й лунке, а в случае подвижных бактерий - и во 2-й лунке.

• Взять полную петлю микробной массы с поверхности 3-й лунки и поместить ее в небольшую чистую пробирку с 3%-м раствором перекиси водорода.
• Положительным результатом является образование пузырьков газа на поверхности петли, отрицательным результатом - отсутствие пузырьков.

ВНИМАНИЕ: Раствор Н2О2 должен быть свежеприготовленным.

• Добавить в лунку 1-2 капли сульфаниловой к-ты (R015) и 1-2 капли нафтиламина (R009).
• Немедленное развитие розово-красного окрашивания свидетельствует о положительной реакции.
• При отрицательной реакции цвет не изменяется .

• Добавить в лунку 3-4 капли реактива Баррита А (R029) и 1 каплю реактива Баррита В (R030).
• При положительном результате в течение 10 мин развивается розово-красное окрашивание.
• Светло-медное окрашивание или отсутствие изменения цвета расценивают как отрицательный результат.

Тест с метиловым красным (6-я лунка):
• Внести 1-2 капли раствора метилового красного (I007).
• При положительном результате среда остается красной.
• Желтое окрашивание или обесцвечивание свидетельствуют об отрицательном результате.

Ферментация углеводов (лунки 7-12):
• При положительном результате цвет меняется с красного на желтый (закисление среды).
• При отрицательном результате цвет среды остается красным.

Общие указания:

1. Перед использованием извлеченные из холодильника реактивы необходимо выдержать при комнатной температуре.
2. Некоторые микроорганизмы дают замедленную ферментацию углеводов, поэтому реакцию оценивают и дополнительно инкубируют стрип в течение 24 ч. Если через 72 ч отмечается оранжевый цвет, реакцию считают отрицательной.
3. Иногда вследствие мутации, применения неадекватных питательных сред для выделения и хранения культуры дают атипичные реакции.
4. Биохимические профили, представленные ниже, взяты из официальных литературных источников и результатов лабораторного тестирования.

Предупреждение:

Клинические пробы и микробные культуры потенциально опасны и требуют осторожного обращения . Засев стрипов и обращение с ними необходимо проводить в асептических условиях. Не допускается контакт реактивов с кожей, глазами или одеждой. Особо едким является 3%-й р-р Н2O2, поэтому не допускается его контакт с кожей, а при попадании его на кожу надо для нейтрализации действия перекиси немедленно залить это место 70% этанолом (не водой!).

Утилизация использованных материалов:

Использованные наборы и инструменты (пипетки, петли и т. п.) перед выбрасыванием в контейнер необходимо дезинфицировать в соответствующем растворе, автоклавировать или сжигать.

Биохимические профили актуальных видов листерий:

Примечания: в соответствии с литературными данными и результатом лабораторных исследований приняты следующие обозначения:
"+" - положительно реагируют более 90% штаммов; "-" - отрицательно реагируют более 90% штаммов; НД - нет данных; v - вариабельная реакция.

Карта интерпретации результата:

Наборы для биохимической идентификации и определения подвижности (Motility Biochemical test kits)
(первые 2 лунки стрипа содержат полужидкую среду для определения подвижности)

Набор HiMotility™ Biochemical Kit for E. coli  (KBM001) предназначен для идентификации 1 культуры E.coli по подвижности и биохимическим свойствам: продукции индола, тестам на утилизацию цитрата, глюкоронидазу, нитратредуктазу, с ОНФГ, лизином и ферментации 4 сахаров (лактозы, глюкозы, сахарозы и сорбита).

Набор HiMotility™ Biochemical Kit for Salmonella (KBM002) предназначен для идентификации 1 культуры сальмонелл по подвижности и биохимическим свойствам: утилизации цитрата, тестам на продукцию уреазы, аргининдегидролазы, лизиндекарбоксилазы, продукцию сероводорода, тесту с ОНФГ и ферментации 4 сахаров (арабинозы, лактозы, мальтозы и сорбита).

Набор HiMotility™ Biochemical Kit for Listeria (KBM003) предназначен для идентификации 1 культуры листерий по подвижности и биохимическим свойствам: хромогенному тесту (учитывают вместе с подвижностью в первых 2-х лунках), тесту на гидролиз крахмала, нитратредуктазу, с эскулином, метиловым красным, Фогеса-Проскауэра, и ферментацию 5 сахаров (ксилозы, альфа-метил-D-маннозида, рамнозы, рибозы, маннита).