Hoyle Medium Base Основа среды Хойла (для коринебактерий дифтерии)

М015

Эту высоко селективную среду используют для выделения и дифференциации Corynebacterium diphtheriae.

Состав**:

Ингредиенты	грамм /литр
Пептический перевар животной ткани	10,00
Мясной экстракт	10,00
Натрия хлорид	5,00
Агар-агар	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,8 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 40,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 55°С и асептично добавить 50 мл лизированной крови и 10 мл 3,5%-ного раствора теллурита калия (FD047). Тщательно перемешать и разлить в чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Хойл (1) модифицировал среду, предложенную Neill, для выделения и дифференциации Corynebacterium diphtheriae. Она отличается тем, что меньше подавляет рост некоторых штаммов биовара mitis и в то же время обеспечивает быстрый рост всех дифтерийных палочек.

Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт служат источником органического азота, углерода и других важнейших питательных веществ. Теллурит калия служит селективным агентом, который подавляет рост нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей. Ввиду высокой селективности данную среду надо использовать в сочетании с такими неселективными средами, как Сывороточная среда Леффлера (М537) и Основа кровяного агара с 10% лошадиной сыворотки (2). Обычно дифтерийные палочки имеются в небольшом количестве и дают рост хорошо изолированных колоний, поэтому материал засевают на среду непосредственно тампоном. При отрицательном результате посевы инкубируют до 72 ч. Для изучения морфологии выросших микроорганизмов готовят мазки, окрашенные генцианвиолетом. Чтобы получить характерные по морфологии и тинкториальным свойствам мазки (окрашенные по Нейссеру или Альбертсу), рекомендуется отбирать изолированные колонии со среды Леффлера. Токсигенность выделенных штаммов Corynebacterium diphtheriae можно определить методом Илека (3).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет янтарную окраску. После добавления лизированной крови и теллурита калия она становится коричнево-красной, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (4,0% вес/об) имеет рН 7,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Характер колоний
Corynebacterium diphtheriae mitis	Хороший или обильный	Серые блестящие
Corynebacterium diphtheriae intermedius (14779)	Хороший или обильный	Серые с темным центром
Enterococcus faecalis (29212)
Escherichia coli (25922)	Хороший или обильный	Мелкие черные
	Подавляется	–

Ссылки:

1. Hoyle I., 1941, Lancet., 1:175.
2. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
3. Elek S.D., 1948, Brit. Med. J., 1:493.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.