.gif){kind=spacer}
Среда для тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра
MR VP Medium (Buffered Glucose Broth) | M070 |
Среду рекомендуют для тестов с метиловым красным и на ацетоин, которые позволяют проводить дифференциацию энтеробактерий.
Тест с метиловым красным на среде MR-VP Medium (M070), слева направо:
1. Enterobacter aerogenes
2. Proteus vulgaris
3. Escherichia coli
4. Контроль (незасеянная среда)
Состав**:
Ингредиенты | грамм /литр |
|---|---|
Пептон забуференный | 7,00 |
Глюкоза | 5,00 |
Калия гидрофосфат | 5,00 |
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 17,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Разлить в пробирки по 10 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.
Принцип и оценка результата:
Clark и Lubs (1) нашли, что добавление индикатора метилового красного к культурам Escherichiacoliприводит к появлению красного окрашивания ввиду сильного закисления среды в результате ферментации глюкозы. Voges-Proskauer (2) отметил развитие красного окрашивания после добавления гидроксида калия к определенным средам после культивирования на них микроорганизмов. Исследователи разработали данную среду для проведения обоих тестов (в разных пробирках). Появление красного окрашивания при добавлении гидроксида калия связано с образованием некоторыми культурами нейтрального продукта – ацетоина (ацетилметилкарбинола) из глюкозы (3). Ацетоин в щелочной среде на воздухе окисляется с образованием диацетила, который реагирует с креатином, что сопровождается появлением красного окрашивания. Эта среда рекомендована международным комитетом (4) для определения микроорганизмов группы «coli-aerogenes».
Тест с метиловым красным проводят через 5 дней инкубирования при 30°С (5), тест Фогеса-Проскауэра – через 24-48 ч инкубирования при той же температуре (6). Предложены разные варианты тестов (5, 7, 8, 9).
Тест Werkman (7): добавляют 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа к 50 мл культуры и 5 мл 10%-ного гидроксида натрия. Встряхивают пробирку для тщательного перемешивания содержимого с воздухом. При положительной реакции в течение нескольких минут развивается стойкий медный цвет.
Тест O’Meara (8): добавляют 25 мг порошка креатина к 5 мл культуры, а затем – 5 мл концентрированного (40%) гидроксида натрия. Тщательного встряхивают пробирку для перемешивания содержимого. При положительной реакции в течение нескольких минут развивается красный цвет.
Levine, Epstein и Voughn (9) модифицировали метод O’Meara, предложив растворять креатин в концентрированном растворе гидроксида калия (R031 - O’Meara Reagent). Voughn, Mitchell и Levin (5) рекомендовали использовать метод Barritt (10): к 5 мл культуры добавляют 1 мл 40%-ного раствора гидроксида калия (R030 – Barrit Reagent B) и 3 мл 5%-ного раствора а-нафтола в абсолютном этаноле (R029 – Barrit Reagent A). При положительной реакции в течение 2-5 минут развивается эозиново-красный цвет.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий кремовый порошок.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет светло-желтый цвет, прозрачна, без какого-либо преципитата.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (1,7% вес/об) имеет рН 6,9 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч при 30°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Рост | Тест MR | Тест VP |
|---|---|---|---|
Enterobacter aerogenes (13048) | Обильный | – (желтый) | + (красный) |
Escherichia coli (25922) | Обильный | + (красный) | – (без изменений) |
Klebsiella pneumoniae (23357) | Обильный | – (желтый) | + (красный) |
Ссылки:
1. Clark and Lubs, 1915, J. Inf. Dis., 17 : 160.
2. Voges and Proskauer, 1898, Zeit, Hyg., 28 : 20.
3. MacFaddin, J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.
4. International Organization for Standardization (ISO), 1993, Draft ISO/DIS 6597.
5. Vaughn, Mitchell and Levine, 1939, J. Am. Water Works Association, 31:993.
6. Kallas, Chinn and Coulter, 1931, J. Bact., 22 : 125.
7. Werkman, 1930, J. Bact., 20 : 121.
8. O’Meara, 1931, J. Path. Bacteriol., 34 : 401.
9. Levine, Epstein and Voughn, 1934, Am. J. of Publ. Health, 24 : 505.
10. Barritt, 1936, J. Path. Bacteriol., 42 : 441.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.