M-CP Agar Base Основа агара M-CP для клостридий

M1354

Данная основа с селективной добавкой рекомендуется специалистами европейского союза (директива 98/83/EC) для выделения и подсчета Clostridium perfringens в воде методом мембранных фильтров.

 

Рост на среде M-CP Agar Base (M1354)
Clostridium perfringens

 

Состав*:

Ингредиенты	грамм/литр
Триптоза	30,00
Дрожжевой экстракт	20,00
Сахароза	5,00
L-Цистеина гидрохлорид	1,00
Магния сульфат (х 7 Н2О)	0,10
Бромкрезоловый пурпурный	0,04
Железа хлорид (х 6 Н2О)	0,09
Индоксил-бета-D-глюкозид	0,06
Агар-агар	15,00

Конечное значение рН (при 25°С) 7,6 ± 0.2
*Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 35,6 г порошка в 485 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С. Асептически добавить растворенное содержимое 1 флакончика с селективной добавкой М-СР (FD153) и 1 флакончика с селективной добавкой М-СР-II (FD154). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Основа агара М-СР готовится в соответствии с прописью R. Armon и P. Payment (1). Она рекомендована также специалистами европейского союза (директива 98/83/EC) для выделения и подсчета Clostridium perfringens в воде методом мембранных фильтров (2).

Триптоза и дрожжевой экстракт являются источниками азотистых веществ, сахароза – ферментируемым субстратом, а бромкрезоловый пурпурный – индикатором рН. Индоксил-бета-D-глюкозид является хромогенным субстратом для бета-D-глюкозидазы или целлобиазы, а фенолфталеина дифосфат – субстратом для определения кислой фосфатазы. Введение в состав среды D-циклосерина и полимиксина В придает ей селективные свойства: в условиях подавления сопутствующих микроорганизмов можно анализировать материал на присутствие как вегетативных, так и споровых форм клостридий. Дополнительная селекция обеспечивается анаэробными условиями инкубирования посевов. Желтые (целлобиозо-отрицательные) колонии предположительно относят к Clostridium perfringens, если после обработки парами аммиака они в течение 30 сек становятся розово-красными. Дифференциация по цвету колоний на агаре М-СР может быть нечеткой, поэтому для дальнейшей идентификации рекомендуется снимать как типичные колонии (меняющие цвет при обработке аммиаком с желтого на красный), так и нетипичные (зеленые или желтые, не меняющие цвет). Окончательную идентификацию проводят по следующим тестам (3): восстановление сульфита, окраска по Граму (грамположительные спорообразующие палочки), подвижность, восстановление нитрата, разжижение желатина, ферментация лактозы.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный порошок желтого цвета.

Плотность готовой среды:

По плотности соответствует 1,5 % агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

В чашках Петри формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета.

Кислотность среды:

При 25°С 7,11 %-й (вес/об) водный раствор имеет рН 7,6 ± 0.2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 44°С.

Штаммы микроорганизмов (ATCC)	Рост	Цвет колоний
Clostridium perfringens (12924)	Хороший	Желтые*
Staphylococcus aureus (25923)	Рост отсутствует	-
Bacillus subtilis (6633)	Рост отсутствует	-
Salmonella серовар Typhi (6539)	Рост отсутствует	-

Примечания: * цвет колоний после воздействия аммиака меняется на розово-красный

Ссылки:

1. Armon R. and Payment P., (1988), Can. J. Microbiol., 34:78-79.
2. Directive of the Council of the European Union 98/83/ЕС
3. D.P. Sartory, М. Field, S.M. Curbishley, and А.М. Pritchard, (1998), Left. Application Microbiol., 27:323-327.

Условия и сроки хранения:

Хранить порошок при температуре ниже 8°С в плотно закрытой таре.

Использовать до даты, указанной на этикетке.