.gif){kind=spacer}
Основа среды Левенштейна–Йенсена без крахмала
Lowenstein Jensen Medium Base w/o Starch | М1542 |
Среда Левенштейна–Йенсена без крахмала рекомендуется для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам.
Состав**:
Ингредиенты | грамм/литр |
|---|---|
L-Аспарагин | 3,60 |
Калия дигидрофосфат | 2,40 |
Магния сульфат | 0,24 |
Магния цитрат | 0,60 |
Малахитовый зеленый | 0,40 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 7,24 г порошка в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина (для некоторых видов микобактерий глицерин не добавлять). Прокипятить до полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (1210С) в течение 15 мин. Приготовить стерильно 1000 мл эмульсии яиц. Асептически смешать 600 мл основы среды и 1000 мл яичной эмульсии до однородного состояния. Внести добавку Графта (Gruft Micobacterial Supplement FD053), если это необходимо. Разлить по пробиркам. Поместить пробирки в наклонном положении для формирования скошенной среды и прогревать (для коагуляции) при 850С в течение 45 мин.
Принцип и оценка результата:
Оригинальная пропись Левенштейна (1) была модифицирована Йенсеном (1), а Графт изменил среду добавлением двух антимикробных агентов (3,4). Основа среды Лвенштейна-Йенсена без крахмала рекомендована ВОЗ для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Среда Левенштейна-Йенсена без картофельного крахмала, с внесенными в нее препаратами, модифицирована и рекомендована для применения Международным союзом против туберкулеза. Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости. Если могут быть выделены культуры бычьего или других глицерофобных видов микобактерий, глицерин добавлять не нужно. Малахитовый зеленый является не только ингибитором роста, но и pH-индикатором. Появление синих зон указывает на повышение кислотности за счет роста грамположительных контаминантов (например, Streptococcus spp.), желтые зоны выявляют контаминацию грамотрицательными бациллами.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий порошок зеленовато-синего цвета.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет светлый голубовато-зеленый цвет с гладкой, слегка опалесцирующей поверхностью.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 350С в атмосфере 5 - 10% углекислого газа.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Среда Левенштейна-Йенсена | С добавкой Графта |
|---|---|---|
M.tuberculоsis H37RV (25618) | Обильный рост, колонии гранулированные, неровные, бородавчатые, сухие, рыхлые | Нет роста |
M.kansasii(12478) | Обильный рост, колонии фотохромогенные, от гладких до неровных | Нет роста |
M.gordonae(14470) | Обильный рост, колонии гладкие, желтые и оранжевые | Нет роста |
M.avium(25291) | Обильный рост, колонии гладкие, не пигментированные | Нет роста |
M.smegmatis(14468) | Обильный рост, колонии морщинистые, слизистые, белые | Рост хороший или обильный, колонии морщинистые, слизистые, белые |
Ссылки:
1.Lowenstein E., 1931, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 120:127.
2.Jensen K.A., 1932, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 125:222.
3.Jensen K.A., Towards, a standardization of Laboratoy methods. Second report of the Sub committee of laboratory methods of the IUAT. BILL Int Union Tuberc. 1955:25 (1-2): 89-104.
4.World Health Organization laboratory services in tuberculosis control, part III culture. Geneva 1998: Publication No. WHO/TB/98:258.
5.International Unit Against Tuberculosis and Lung Disease.Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Minimum requirments. Role and operation in low-income country, Paris 1998.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже 30 °С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.