Casman Agar / Broth Base Основа агара / бульона Казмена

М201 / М766

Эти среды с добавлением крови применяют для выделения в условиях пониженного парциального давления кислорода прихотливых микроорганизмов из клинического материала.

Состав**:

Ингредиенты	М201 грамм/литр	М766 грамм/литр
Протеозопептон	10,00	10,00
Триптоза	10,00	10,00
Мясной экстракт	3,00	3,00
Глюкоза	0,50	0,50
Крахмал кукурузный	1,00	1,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Никотинамид	0,05	0,05
Пара-аминобензойная кислота (ПАБК)	0,05	0,05
Агар-агар	14,00	–
Конечное значение рН (при 25°С)	7,3 ± 0,2	7,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 43,6 г порошка М201 или 29,6 г порошка М766 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить в пробирки или флаконы и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить стерильную 5%-ную кровь (лизированную водой при соотношении вода:кровь = 3:1) до конечной концентрации 0,15%. Тщательно перемешать и разлить в соответствующие емкости.

Принцип и оценка результата:

Представители родов Haemophilus и Neisseria являются прихотливыми микроорганизмами и нуждаются в дополнительных факторах роста. Данные среды, обогащенные кровью, описал Casman (1, 2, 3) для культивирования гонококков и гемофильных палочек, заменив ими среды с мясным настоем, свежей и гретой кровью и т.д.

Протеозопептон, триптоза и мясной экстракт дают аминокислоты и другие сложные питательные вещества. Глюкоза улучшает рост патогенных кокков. Кукурузный крахмал предупреждает подавляющее действие жирных кислот на Neisseria gonorrhoeae без влияния на гемолиз, но с нейтрализацией подавляющей активности глюкозы. С кровью в среду вносятся необходимые факторы роста гемофильных бактерий: гемин (фактор Х) и никонинамидадениндинуклеотид (НАД, фактор V). Предпочтительно для этой цели использовать лошадиную или кроличью кровь, т.к. в них относительно мало фермента, разрушающего НАД (4). С целью предотвращения разрушения НАД в среду добавляется и никотинамид.

Посев рекомендуется делать сразу после доставки материала в лабораторию. После инкубирования Haemophilus influenzae образуют на данной среде бесцветные или серые колонии с характерным “мышиным” запахом, Neisseria gonorrhoeae формируют маленькие бесцветные или серовато-белые колонии.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,4%-ному агаровому гелю (М201).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует. После добавления крови среда становится вишнево-красного цвета и опалесцирует, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М201 (4,36% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, М766 (2,96% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Рост	Гемолиз
Haemophilus influenzae (35056)	Хороший или обильный	Нет
Neisseria meningitidis (13090)	Обильный	Нет
Streptococcus pneumoniae (6303)	Обильный	Альфа
Streptococcus pyogenes (19615)	Обильный	Бета
Streptococcus mitis (9895)	Обильный	Бета

Ссылки:

1. Casman, 1947, Am. J. Clin. Pathol., 17:281.
2. Casman, 1942, J. Bact., 43:33.
3. Casman, 1947, J. Bact., 53:561.
4. Krunveide and Kuttner, 1938, J. Exp. Med., 67:429.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.