PKU Test Agar Base / Agar with Thienylalanine Основа агара для теста на фенилкетонурию / Агар с тиенилаланином

M282 / M398

Этот агар рекомендован для оценки содержания фенилаланина в крови при определении фенилкетонурии (ФКУ).

Состав**:

Ингредиенты	М282 грамм/литр	М398 грамм/литр
L-Глютаминовая кислота	0,50	0,50
DL-Аланин	0,50	0,50
Аспарагин	0,50	0,50
Глюкоза	10,00	10,00
Калия гидрофосфат	15,00	15,00
Калия дигидрофосфат	5,00	5,00
Аммония хлорид	2,50	2,50
Аммония нитрат	0,50	0,50
Натрия сульфат	0,50	0,50
Магния сульфат	0,05	0,05
Марганца хлорид	0,005	0,005
Железа хлорид	0,005	0,005
Кальция хлорид	0,0025	0,0025
В-2-Тиенилаланин	–	0,0033
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 50,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 50°С, добавить споры Bacillus subtilis и 3,3 мг В-2-тиенилаланина (к среде М398). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Эта среда разработана Demain (1). Guthrie и Tieckelmann (2, 3, 4) модифицировали тест подавления для исследования образцов крови новорожденных с целью раннего выявления фенилкетонурии при низких уровнях фенилаланина в крови путем определения уровней сывороточного фенилаланина или уровня фенилпирувата в моче. ФКУ является врожденным дефектом, вызванным отсутствием фермента фенилаланингидроксилазы. При этом состоянии фенилаланин накапливается в крови и выделяется с мочой (фенилкетонурия), развивается повреждение мозга и замедляется развитие индивидуума. Данный агар является синтетической средой определенного состава, в который добавляется В-2-тиенилаланин. Он является агаровой основой для проведения тестов с образцами крови. Этот тест основан на том, что рост бактерий Bacillus subtilis обычно подавляется в присутствии В-2-тиенилаланина, но при добавлении в среду L-фенилаланина отмечается хороший рост (в результате конкурирующего влияния L-фенилаланина). Уровень фенилаланина в крови можно определить по наличию роста указанной культуры. Кроме фенилаланина могут быть использованы пролин, фенилпируват или фениллактат.

Небольшие диски фильтровальной бумаги, пропитанные кровью пациента, укладывают на данный агар с В-2-тиенилаланином, засеянный культурой Bacillus subtilis. Контрольные диски, пропитанные различными концентрациями L-фенилаланина (2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20 мг%) также укладывают на ту же среду. После инкубирования в течение ночи сравнивают диаметры зон роста вокруг опытного и контрольных дисков. Зона, соответствующая уровню 4 мг% или более, оценивается как предварительный положительный результат. Повторные исследования с двойными дисками, химическое или спектрофотометрическое исследования позволяют уточнить результат (5, 6).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М282 или М398 (5,0% вес/об) имеют рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штамма через 12-16 ч при 35-37°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Концентрация фенилаланина (мг%)	Рост
Bacillus subtilis (6633)	2	Слабый или отсутствует
Bacillus subtilis (6633)	4	Обильный
Bacillus subtilis (6633)	6	Обильный
Bacillus subtilis (6633)	8	Обильный
Bacillus subtilis (6633)	10	Обильный
Bacillus subtilis (6633)	12	Обильный

Ссылки:

1. Demain A.L., 1958, J. Bact., 75:517.
2. Guthrie R., 1961, J.Am. Med. Assoc., 178:863.
3. Guthrie R and Tieckelmann H., 1960, London Conference on the Scientific study of Mental Deficiency, London.
4. Guthrie and Susi, 1963, Pediatrics, 32:338.
5. Ambrose J., et al, 1967, Clin. Chem. Acta., 15:493.
6. Ambrose J., 1969, Clin. Chem., 15:15.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.