Агар / Бульон с эозином и метиленовым синим

Эти среды рекомендуют для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы из клинического и другого материала.

EMB Agar (M317) Рост Escherichia coli

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 36,0 г порошка М317 или 22,5 г порошка М503 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Остудить до 50°С и встряхнуть для окисления метиленового синего (чтобы восстановить его синий цвет и размешать хлопьевидный преципитат). Если среда используется в тот же день, ее можно не автоклавировать.

Предупреждение: среду надо хранить в темноте, чтобы не допустить ее окисления на свету.

Принцип и оценка результата:

Эта среда впервые предложена Holt-Harris и Teague (1), а затем модифицирована Levine (2). Приведенные прописи являются комбинацией указанных сред: в их состав входит Пептический перевар животной ткани и фосфат по Левину и два углевода, предложенные первыми авторами.

Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Данные красители служат в качестве дифференцирующими индикаторами ферментации углеводов. Соотношение эозина и метиленового синего доведено примерно до 6:1. Сахароза добавляется в среду в качестве альтернативного углевода для типичных грамотрицательных бактерий, ферментирующих лактозу медленно или иногда не ферментирующих ее. Колиформные микроорганизмы образуют на этой среде лилово-черные колонии в соответствии с окраской указанных индикаторов при низких значениях рН. Комплекс красителей при этом сорбируется материалом колонии. Неферментирующие микроорганизмы вероятно повышают рН окружающей среды за счет окислительного дезаминирования белка, что ведет к растворению комплекса метиленовый синий–эозин и формированию бесцветных колоний (3). В присутствии эозина и метиленового синего не могут расти некоторые штаммы сальмонелл и шигелл. Для дальнейшей идентификации выделенных культур требуется проведение дополнительных тестов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю (М317).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М317 (3,6% вес/об) или М503 (2,25% вес/об) имеют рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Ссылки:

1. Holt-Harris and Teague,1916, J. Infect. Dis., 18 : 596.
2. Levine, 1918, J. Infect. Dis., 23:43.
3. Howard B.J., 1994, Clinical and Pathogenic Microbiology, 2nd ed., Mosby Year Book, Inc.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С в темноте.