.gif){kind=spacer}
Бульон с лизином / орнитином / аргинином
Moeller Decarboxylase Broth Base / Broth with Lysine Hydrochloride / Broth with Ornithine Hydrochloride / Broth with Arginine Hydrochloride | M393 / M687 / М688 / М689 |
Среды используют для дифференциации бактерий по их способности декарбоксилировать аминокислоты.
Определение лизиндекарбоксилазы на среде Мюллера (M393), слева направо по 2 пробирки:
Salmonella серовара Enteritidis, Proteus mirabilis, Escherichia coli и контроли (незасеянные среды);
в 1, 3, 5 и 7 пробирках – бульон с L-лизином, в остальных – основа декарбоксилазного бульона без аминокислот.
Состав**:
Ингредиенты | М393 грамм/литр | М687 грамм/литр | М688 грамм/литр | М689 грамм/литр |
|---|---|---|---|---|
Пептический перевар животной ткани | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
Мясной экстракт | 5,00 | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
Глюкоза | 0,50 | 0,50 | 0,50 | 0,50 |
Бромкрезоловый пурпурный | 0,01 | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
Крезоловый красный | 0,005 | 0,005 | 0,005 | 0,005 |
Пиридоксаль | 0,005 | 0,005 | 0,005 | 0,005 |
L-Лизина гидрохлорид | – | 10,00 | – | – |
L-Орнитина гидрохлорид | – | – | 10,00 | – |
L-Аргинина гидрохлорид | – | – | – | 10,00 |
Конечное значение рН (при 25°С) 6,0 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 10,52 г порошка М393 в 1000 мл дистиллированной воды. Добавить 10,0 г L-Лизина, L-Орнитина, L-Аргинина или другой L-аминокислоты. При использовании DL-аминокислот применять 2% концентрации. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. В случае добавления L-Орнитина требуется подводить рН. Разлить по 5 мл в пробирки с завинчивающимися крышками. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 10 мин. Размешать 20,52 г порошка М687 или М688 или М689 в дистиллированной воде и стерилизовать, как указано выше.
Принцип и оценка результата:
Эти среды используют для дифференциации грамотрицательных бактерий по их способности декарбоксилировать аминокислоты. Декарбоксилазный бульон был разработан Мюллером для определения декарбоксилаз лизина и орнитина и дегидролазы аргинина (1). Ранее бактериальные декарбоксилазы определяли другими методами (2, 3). Определение орнитиндекарбоксилазы помогает дифференцировать клебсиеллы и энтеробактеры. Клебсиеллы неподвижны и не обладают орнитиндекарбоксилазной активностью, а энтеробактеры подвижны и имеют орнитиндекарбоксилазу, за исключением вида Enterobacter agglomerans (4).
Мясной экстракт и пептический перевар животной ткани служат источником углерода, азота, минеральных веществ, витаминов В и других важных факторов роста бактерий. Глюкоза служит источником ферментируемых углеводов, а пиридоксаль – ко-фактором для декарбоксилирования. Бромкрезоловый пурпурный и крезоловый красный служат индикаторами рН. Если засеяны бактерии, ферментирующие глюкозу, появляются кислые продукты, изменяющие цвет индикатора с лилового на желтый. Кислая среда стимулирует декарбоксилазную активность. В результате декарбоксилирования лизина образуется кадаверин, орнитина – путресцин. Аргинин вначале гидролизуется до орнитина, а затем образуется путресцин. Образовавшиеся амины защелачивают среду и ее цвет меняется с желтого на лиловый. Если декарбоксилирования нет, среда остается кислой и имеет желтый цвет. Для контроля каждый испытуемый штамм надо параллельно засевать в среду без аминокислот.
Засеянные пробирки необходимо защищать от воздуха слоем стерильного минерального масла, т.к. в результате ощелачивания поверхности среды могут наблюдаться ложноположительные реакции.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий зеленовато-желтый порошок.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет лиловую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
Кислотность среды:
При 25°С водные растворы М393 (1,05% вес/об), М687, М688 или М689 (2,05% вес/об) имеют рН 6,0 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 4 дней при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Лизин | Аргинин | Орнитин |
|---|---|---|---|
Citrobacter freundii (8090) | – | ± | ± |
Enterobacter aerogenes (13048) | + | – | + |
Escherichia coli (25922) | ± | ± | ± |
Klebsiella pneumoniae (13883) | + | – | – |
Proteus vulgaris (13315) | – | – | – |
Proteus mirabilis (25933) | – | – | + |
Pseudomonas aeruginosa (9027) | – | + | – |
Salmonella paratyphi А | – | (+) или + | + |
Salmonella typhi (6539) | + | (+) или – | – |
Shigella flexneri (12022) | – | – или (+) | – |
Shigella sonnei (25931) | – | ± | + |
Shigella dysenteriae (13313) | – | – или (+) | – |
Serratia marcescens (8100) | + | – | + |
Примечания:
"+" - положительная реакция, лиловый цвет,
"–" - отрицательная реакция, желтый цвет или без изменения цвета,
"±"- вариабельный результат,
"+" - замедленная положительная реакция.
Ссылки:
1. Moeller V., 1955, Acta Pathol. Microbiol. Scand. 36:158.
2. Gale G. F., 1940, Biochem. J., 34:392.
3. Gale and Epps, 1943, Nature, 152:327.
4. MacFaddin J., 1980, Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria, 2nd ed., Williams and Wilkins, Baltimore.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.