B.Y.E. Agar / Broth Base Агар B.Y.E. / Бульонная основа B.Y.E. для культивирования микоплазм и L-форм бактерий

M470 / M471

Данные среды являются упрощенной средой для культивирования микоплазм и близких к ним микроорганизмов, а также L-форм бактерий.

Состав**:

Ингредиенты	M470 грамм/литр	M471 грамм/литр
Настой мозга и сердца (М210)	37,00	37,00
Дрожжевой экстракт	2,00	2,00
Агар-агар	13,00	–
Конечное значение рН (при 25°С) 7,9 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 52,0 г порошка М470 или 39,0 г порошка М471 в 850 мл дистиллированной воды.

Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С, асептично добавить 150 мл стерильной крови (или сыворотки) человека или животного. Осторожно перемешать и разлить в чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Среды B.Y.E., разработанные Barile, Yaguchi и Eveland, являются упрощенной средой для рутинных исследований по эколого-эпидемиологическим особенностям и участию в патогенезе соответствующих заболеваний микоплазм и близких к ним микроорганизмов (PPLO), а также L-форм бактерий (1). Посевы делают в двух повторностях: один инкубируют в аэробных, второй – в анаэробных условиях, в течение 48 ч или более. Обычно рост появляется на 3-5 сутки, однако, отрицательный результат выдают не ранее 10 суток. Культивирование в анаэробных условиях наиболее важно в первые 3 дня, дальнейшее инкубирование можно проводить в аэробных условиях. На этих средах можно выделять PPLO (при уретритах, изъязвлениях полового члена, из отделяемого шеечного канала), а также L-формы коринебактерий, нейссерий, стрептококков. Их используют для выявления микоплазменной (PPLO) контаминации культур тканей (2), для работы с мембранными фильтрами (3). В бульоне B.Y.E. PPLO растут, образуя нежный осадок на дне пробирки.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,3%-ному агаровому гелю (М470).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках или чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М470 (5,2% вес/об) или М471 (3,9% вес/об) имеют рН 7,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 5-10 дней при 35°С в анаэробных условиях с увлажнением атмосферы.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Mycoplasma bovis (25523)	Хороший или обильный
Mycoplasma gallinarum (19708)	Хороший или обильный
Mycoplasma pneumoniae (15531)	Хороший или обильный
Streptococcus pneumoniae (6303)	Хороший или обильный

Ссылки:

1. Barile, Yaguchi, Eveland, 1958, Am. J. Clin, Path., 30:171.
2. Barile, 1962, National Cancer Institute Monograph, No.7:5.
3. Barile, 1962, J. Bact, 83:430.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С в вертикальном положении и использовать как можно быстрее.