Differential Reinforced Clostridial Broth Дифференциальный бульон для клостридий

М549 / М549I

Среду используют для культивирования видов Clostridium из воды.

Определение клостридий методом наиболее вероятных чисел
на среде Differential Reinforced Clostridial Broth (M549), слева направо:
1.Незасеянная среда
2.Clostridium perfringens
3.Clostridium sporogenes

 

 

Состав**:

Ингредиенты	М549 грамм/литр	М549I грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	10,00	–
Триптоза	–	10,00
Говяжий экстракт	10,00	–
Мясной экстракт	–	10,00
Дрожжевой экстракт	1,50	1,50
Крахмал	1,00	1,00
Натрия ацетат гидрированный	5,00	5,00
Глюкоза	1,00	1,00
L-цистеина гидрохлорид	0,50	0,50
Конечное значение рН (при 25°С)	7,2 ± 0,2	7,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 29,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Непосредственно перед использованием в среду асептично добавляют стерилизованную фильтрованием смесь, которую готовят следующим образом. Для приготовления среды с обычной концентрацией, на каждые 25 мл среды добавляют 0,5 мл смеси, состоящей из равных объемов 4%-ного (вес/об) раствора натрия сульфита и 7%-ного (вес/об) раствора цитрата железа, среды двойной концентрации – на 50 мл вносят 2,0 мл смеси, на 10 мл – 0,4 мл, соответственно. Тщательно перемешивают.

Принцип и оценка результата:

Эта среда основана на прописи Barnes и Ingram (1), а также Gibbs и Freame (2) для культивирования и подсчета сульфитредуцирующих клостридий в пищевых продуктах и воде пробирочным методом. С небольшими модификациями (замена пептона на триптозу) эту среду рекомендует комитет ISO (3). Дифференциация происходит на основе способности редуцировать сульфит до сульфида, который с ионами железа образует черный преципитат. Триптоза или пептический перевар животной ткани, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, крахмал, натрия ацетат обеспечивают присутствие в среде важнейших нутриентов для метаболизма микробов. Глюкоза является ферментируемым субстратом. L-цистеина гидрохлорид действует, как редуцирующий агент.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,9% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 1 недели при 30°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Почернение среды*
Clostridium perfringens (13124)	Хороший или обильный	+
Clostridium sporogenes (11437)	Хороший или обильный	+

Примечание: * образование сульфида железа

Ссылки:

1. Barnes E.M. and Ingram M., 1956, J. Appl. Bacteriol., 19(1):117.
2. Gibbs B.M. and Freame B., 1965, J. Appl. Bacteriol., 28(1):95.
3. International Organization for Standardization (ISO), 1986, Draft ISO/DIS : 6461-1.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.