NNN (Modified) Medium (Twin Pack) Среда NNN модифицированная (двухкомпонентная)

M681

Этот агар используется для культивирования лейшманий и трипаносом. 

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Часть А
Мясной экстракт	3,00
Мясной пептон	5,00
Натрия хлорид	8,00
Агар-агар	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2
Часть В
Натрия хлорид	8,00
Калия хлорид	0,20
Кальция хлорид	0,20
Калия дигидрофосфат	0,30
Глюкоза	2,50
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Часть А:

Размешать 31,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 45 °С и асептически добавить стерильную дефибринированную кровь кролика или человека. Тщательно перемешать и разлить по 5 мл в пробирки или по 25 мл во флаконы. Оставить среду в прохладном месте в наклонном положении для формирования скоса.

Часть В:

Размешать 11,2 г порошка части В в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить и асептически добавить по 2 мл в пробирки ли по 15 мл во флаконы поверх застывшей среды из части А.

Принцип и оценка результата:

Этот агар предложет Novy, McNeal и Nicolle (1, 2) для культивирования лейшманий и Trypanosoma cruzi. Для диагностической работы обычно используют модифицированную среду. Она состоит из основы кровяного агара и покровной среды. Основа кровяного агара высоко питательна, что поддерживает рост прихотливых микроорганизмов, в том числе лейшманий и трипаносом. Материал засевают в жидкую часть среды и инкубируют. Микроорганизмы размножаются на границе сред. Амастиготы трансформируются в промастиготы в течение примерно 24 ч (3).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Часть А:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Часть В:

Гомогенный сыпучий белый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5% агаровому гелю (часть А).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда из части А перед добавлением крови имеет светло-янтарную окраску, слегка опалесцирует, а после добавления крови становится красной: часть В – прозрачная бесцветная жидкость.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор части А (3,1% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, а водный раствор части В (1,12% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37 °С .

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Leishmania donovani	Обильный
Trypanosoma cruzi	Обильный

Ссылки:

1. Novy FG and McNeal WJ (1904) J. Inf. Diseases B, 1:1.
2. Nicolle A (1908) Comptes rendus de l’ Academie des Sciences (Paris) 146:842.
3. Mackie and McCartney Practical Medical Microbiology, 1989); 13^th Edition, Volume 2, Collee JG, Duguid JP, Fraser AG, Marmion BP (Eds.) 700-734.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +30°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.