C.L.E.D. Agar (with Bromo Thymol Blue) / without indicator Лактозо-цистиновый агар (с бромтимоловым синим) / Лактозо-цистиновый агар (без индикатора)

M792 / М1146

Среду используют для выделения, подсчета и идентификации возбудителей мочевых инфекций (по ферментации лактозы).

 

C.L.E.D. Agar with Bromothymol Blue (M792)
Рост Escherichia coli (желтые колонии),
Proteus vulgaris (крупные голубые клонии) и
Salmonella серовара Typhi (мелкие голубые колонии)

 

 

Состав**:

Ингредиенты	М792 грамм/литр	М1146 грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	4,00	4,00
Гидролизат казеина	4,00	4,00
Мясной экстракт	3,00	3,00
Лактоза	10,00	10,00
L-Цистин	0,128	0,128
Бромтимоловый синий	0,02	–
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 36,15 г порошка М792 в 1000 мл дистиллированной воды или 36,1 г порошка М1146 в 998 мл дистиллированной воды. Добавить к среде М1146 растворенное в воде содержимое 1 флакончика с индикаторной добавкой (FD091). Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

По данным Sandys (1), роение протеев на плотной среде можно ограничить путем уменьшения количества электролитов в среде. Ранее такого эффекта добивались введением в среду алкоголя, поверхностно-активных веществ, азида натрия, борной кислоты и т.д. (1). Позже среда была модифицирована Mackey и Sandys (2), которые заменили маннит на лактозу и сахарозу, повысили концентрацию агара и бромтимолового синего. Эти же авторы затем изменили состав среды, назвав ее CLED (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient): из состава была выведена сахароза и включен цистин, который обеспечивает рост карликовых цистинзависимых колиформных бактерий (3). Эту среду рекомендуют для клинических исследований мочи микробиологическим методом.

Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина и мясной экстракт обеспечивают запас питательных веществ в среде. Лактоза является дифференцирующим углеводом. Цистин способствует росту карликовых колоний колиформных бактерий. Бромтимоловый синий является индикатором рН, который желтеет в кислой среде.

Степень бактериурии на этой среде можно определять, высевая мочу в соответствующих разведениях. Посевы рекомендуется делать сразу после получения пробы мочи. На этой среде может отсутствовать рост шигелл. Обсемененность мочи зависит от ряда факторов и может оказаться заниженной (на фоне антибиотикотерапии, при кислых значениях рН и т.д.).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет зеленую окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М792 или М1146 (3,61% вес/об) имеют рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний
Escherichia coli (25922)	Обильный	Непрозрачные желтоватые с желтым центром
Klebsiella pneumoniae (13883)	Обильный	Желтые или беловато-голубые
Proteus vulgaris (13315)	Обильный	Голубые
Salmonella typhi (6539)	Обильный	Голубоватые
Staphylococcus aureus (25923)	Обильный	Ярко-желтые
Enterococcus faecalis (29212)	Обильный	Слегка желтоватые или зеленоватые

Ссылки:

1. Sandys, 1960, J. Med. Lab. Technol., 17:224.
2. Mackey and Sandys, 1965, Br. Med. J., 2:1286.
3. MacKey and Sandys, 1966, Br. Med. J., 1:1173.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.