Motility-Indole-Lysine Medium (MIL Medium) Полужидкая комбинированная среда с лизином

M847

Эту среду используют для идентификации энтеробактерий по подвижности, лизиндекарбоксилазной, лизиндезаминазной активности и образованию индола.

 

Рост энтеробактерий на среде MIL (M847), слева направо:
1. Escherichia coli
2. Salmonella серовара Typhi
3. Salmonella серовара Enteritidis
4. Klebsiella pneumoniae
5. Контроль (незасеянная среда)

 

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	10,00
Гидролизат казеина	10,00
Дрожжевой экстракт	3,00
L-лизина гидрохлорид	10,00
Глюкоза	1,00
Железа аммонийного цитрат	0,50
Бромкрезоловый пурпурный	0,02
Агар-агар	2,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,6 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 36,52 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить до полного растворения частиц. Разлить по 5 мл в пробирки. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в вертикальном положении.

Принцип и оценка результата:

Эту среду готовят в соответствии с прописью Reller и Merrett (1). На ней в одной пробирке можно учитывать 4 дифференцирующих признака. Для предварительной идентификации энтеробактерий данную среду рекомендуется использовать параллельно с Трехсахарным железосодержащим агаром (М021) и Мочевинным агаром (М112).

Культуры засевают уколом и инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч. Перед учетом индолообразования проверяют тесты на подвижность, дезаминазу и декарбоксилазу лизина. Подвижные культуры дают диффузный рост в среде, неподвижные растут по ходу укола. На дезаминирование лизина указывает красное или красно-коричневое окрашивание верхней части среды, на декарбоксилирование лизина – лиловое окрашивание всей среды. Данный цвет может варьировать по интенсивности, что зависит от восстановления индикатора. Для определения индола в пробирку добавляют 3-4 капли реактива Ковача (R008). При наличии индола развивается красное окрашивание в виде кольца.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,2%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет красновато-пурпурную окраску, прозрачна, если в пробирках формируется столбик геля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,65% вес/об) имеет рН 6,6 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 25-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Подвижность	Индол	Лизиндезаминаза	Лизиндекарбоксилаза
Escherichia coli (25922)	+	+	–	+
Enterobacter aerogenes (13048)	+	–	–	+
Klebsiella pneumoniae (13883)	–	– (+)	–	+
Proteus vulgaris (13315)	+	+	+	–
Proteus mirabilis (25933)	+	–	+	–
Salmonella enteritidis (13076)	+	–	–	+
Shigella flexneri (12022)	–	– or +	–	–

Примечания:
"+" - положительная реакция;
"–" - отрицательная реакция;
"(+)" - иногда положительная реакция.

Ссылки:

1. Reller and Merrett, 1975, J. Clin. Microbiol., 2:247.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.