Diphtheria Virulence Agar Base (Modified) Основа агара для определения токсигенности дифтерийных микроорганизмов (модифицированная)

М882R

Эту среду используют для проверки токсигенности Corynebacterium diphtheriae.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Вытяжка из мозга теленка	10,00
Вытяжка из бычьего сердца	10,00
Натрия хлорид	5,00
Натрия карбонат	0,60
Агар	10,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,8 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 35,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц и разлить по 17 мл. в соответствующие пробирки . Стерилизовать автоклавированием при 110°С в течение 30 мин. Остудить до 45-50°С. Асептично добавить 3 мл лошадиной сыворотки (RM1239) или сыворотки КРС (Рекомендуется использовать свободную от бактерий и вирусов лощадиную сыворотку или сыворотку КРС) в каждую пробирку. Перемешать и быстро вылить в чашку Петри.

Принцип и оценка результата:

Эта среда предложена Hermann и соавт. (1) для получения обильного роста Corynebacterium diphtheriae. Илек (2) показал возможность использования техники диффузии в агаре для выявления дифтерийного токсина in vitro. Стандартизацию метода в сравнительных опытах на животных провел King и соавт. (3). Однако было показано, что сыворотки животных разных видов дают разные результаты, и Hermann и соавт. (1) разработали среду, на которой этого удается избежать. В соответствии с их предложением, среда обогащается 1 г кислотного гидролизата казеина, 1 мл глицерина и 1 мл твина-80 (4). После инкубирования токсигенных штаммов в среде образуется линия преципитата. Теллурит калия подавляет рост большинства грамотрицательных микроорганизмов и большинство представителей нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей, но не действует на дифтерийную палочку, а также Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, энтерококки и некоторые штаммы Staphylococcus epidermidis.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет янтарную окраску, слегка опалесцирует, когда в чашках Петри образуется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,75% вес/об) имеет рН 7,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-72 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Линия преципитата
Corynebacterium diphtheriae gravis	Обильный	+
Corynebacterium diphtheriae intermedius	Обильный	+
Corynebacterium diphtheriae mitis	Обильный	+
Staphylococcus epidermidis (25923)	Отсутствует или слабый	–
Bacillus subtilis (6633)	Подавляется	–

Ссылки:

1. Hermann, Moore and Parsons, 1958, Am. J. Clin. Path., 29:181.
2. Elek, 1948, Brit. Med. J., 1:493.
3. King, Frobisher and Parsons, 1949, Am. J. Pub. Health, 39:1314.
4. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.