Lowenstein Jensen Medium Base w/o Starch
Основа среды Левенштейна–Йенсена без крахмала
М1542

 

Среда Левенштейна–Йенсена без крахмала рекомендуется для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Состав**:

Ингредиенты
грамм/литр
L-Аспарагин
3,60
Калия дигидрофосфат
2,40
Магния сульфат
0,24
Магния цитрат
0,60
Малахитовый зеленый
0,40

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 7,24 г порошка в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина (для некоторых видов микобактерий глицерин не добавлять). Прокипятить до полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (1210С) в течение 15 мин. Приготовить стерильно 1000 мл эмульсии яиц. Асептически смешать 600 мл основы среды и 1000 мл яичной эмульсии до однородного состояния. Внести добавку Графта (Gruft Micobacterial Supplement FD053), если это необходимо. Разлить по пробиркам. Поместить пробирки в наклонном положении для формирования скошенной среды и прогревать (для коагуляции) при 850С в течение 45 мин.

Принцип и оценка результата:

Оригинальная пропись Левенштейна (1) была модифицирована Йенсеном (1), а Графт изменил среду добавлением двух антимикробных агентов (3,4). Основа среды Лвенштейна-Йенсена без крахмала рекомендована ВОЗ для оценки чувствительности микобактерий к противотуберкулезным препаратам. Среда Левенштейна-Йенсена без картофельного крахмала, с внесенными в нее препаратами, модифицирована и рекомендована для применения Международным союзом против туберкулеза. Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости. Если могут быть выделены культуры бычьего или других глицерофобных видов микобактерий, глицерин добавлять не нужно. Малахитовый зеленый является не только ингибитором роста, но и pH-индикатором. Появление синих зон указывает на повышение кислотности за счет роста грамположительных контаминантов (например, Streptococcus spp.), желтые зоны выявляют контаминацию грамотрицательными бациллами.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок зеленовато-синего цвета.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светлый голубовато-зеленый цвет с гладкой, слегка опалесцирующей поверхностью.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 350С в атмосфере 5 - 10% углекислого газа.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Среда Левенштейна-Йенсена
С добавкой Графта
M.tuberculоsis H37RV (25618)
Обильный рост, колонии гранулированные, неровные, бородавчатые, сухие, рыхлые
Нет роста
M.kansasii(12478) 
Обильный рост, колонии фотохромогенные, от гладких
до неровных
Нет роста
M.gordonae(14470) 
Обильный рост, колонии гладкие, желтые и оранжевые
Нет роста
M.avium(25291) 
Обильный рост, колонии гладкие,
не пигментированные
Нет роста
M.smegmatis(14468) 
Обильный рост, колонии морщинистые, слизистые, белые
Рост хороший или обильный,
колонии морщинистые, слизистые, белые

Ссылки:

1.Lowenstein E., 1931, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 120:127.
2.Jensen K.A., 1932, Zentralb. Bacteriol., Parasitenkd. Infektionskr. Abt.I. Orig. 125:222.
3.Jensen K.A., Towards, a standardization of Laboratoy methods. Second report of the Sub committee of laboratory methods of the IUAT. BILL Int Union Tuberc. 1955:25 (1-2): 89-104.
4.World Health Organization laboratory services in tuberculosis control, part III culture. Geneva 1998: Publication No. WHO/TB/98:258.
5.International Unit Against Tuberculosis and Lung Disease.Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Minimum requirments. Role and operation in low-income country, Paris 1998.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже 30 °С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.